免疫組化常見問題分析

1. IHC實驗結(jié)果顯色過深

一抗?jié)舛冗^高或孵育時間過長——降低一抗?jié)舛然驕p少孵育時間

孵育溫度過高——選擇4℃或室溫孵育

2. 實驗結(jié)果存在非特異性顯色

石蠟切片脫蠟不干凈——延長脫蠟時間

蛋白封閉不充分——增加蛋白封閉時間

組織富含內(nèi)源性生物素與過氧化物酶——使用相關(guān)試劑進行封閉

3. 實驗結(jié)果顯色弱或無染色

一抗?jié)舛冗^低或孵育時間過短——增加一抗?jié)舛然蜓娱L孵育時間

組織中無目的抗原的表達

一抗種屬來源與二抗不匹配

注意事項

切片脫蠟和水化要充分，加反應(yīng)液時要覆蓋組織充分；每次加液前甩干洗滌液，同時防止干片。

一抗的沖洗原則：單獨沖洗，防交叉反應(yīng)污染；溫柔沖洗，防止切片脫落；推薦浸洗方式。

有條件的話最好立即拍照，若不能及時拍照，也要封好片和用指甲油封固，保持避光和濕度。